核酸實驗不穩定?可能是酶在“作祟”
瀏覽數量: 0 作者: 本站編輯 發布時間: 2025-11-03 來源: 本站
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高質量核酸是qPCR、轉錄組測序的基礎,
但自然界中的DNase/RNase
會快速降解樣本,導致實驗失敗。
尤其是RNase活性穩定、難徹底失活,
微量污染就可能導致實驗失?。?/span>
因此搭建無DNase/RNase的實驗環境,
對出結果至關重要。實驗卡殼不用愁,
科研人專屬電子木魚已開光!
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DNase和RNase是分別特異性降解DNA和RNA的水解酶。它們通過切斷核酸分子中的磷酸二酯鍵使核酸鏈斷裂,導致降解。RNase因其二硫鍵結構而具有極高的穩定性,能夠抵抗高溫煮沸甚至變性劑,在失活后還可重新折疊恢復活性,這使得它成為RNA相關實驗的頭號天敵。污染來源主要分為兩大類:
? 實驗人員:皮膚、汗液、唾液(飛沫)和頭發均含有大量核酸酶。
? 實驗器材:移液器、吸頭、離心管、玻璃器皿、實驗臺面及儀器按鍵等若未妥善處理,極易附著核酸酶。
? 試劑與水:普通蒸餾水或去離子水以及化學試劑在生產儲存過程中可能受到污染。
? 空氣中灰塵微粒:可攜帶核酸酶落入開放放置的試劑或樣本中。
? 內源性污染是指樣本自身攜帶的核酸酶,所有生物組織和細胞樣品均含有內源性核酸酶。一旦樣本離開活體或其原有生長環境,內源酶便會開始降解RNA/DNA。降解速度取決于內源酶含量和所處環境溫度。例如,肝臟、胰腺、脾臟、胸腺、腦組織以及植物組織等均含有豐富的內源核酸酶,若處理不當,核酸會迅速降解。
針對這些潛在風險,選擇可靠的無酶耗材是防控污染的第一步。愛津生物所有產品——從離心管、吸頭、深孔板到PCR板、細胞培養系列等均在十萬級無塵車間內生產制造,出廠前經嚴格檢測,確保無DNase/RNase污染、無熱原、無PCR抑制劑。讓科研人員能夠安心專注于實驗本身,而非擔憂外源風險。
建立潔凈的核酸操作環境需從環境、耗材、操作和試劑多方面系統入手。
盡可能設立用于RNA/DNA操作的專用超凈工作臺或區域。定期使用核酸酶清除劑擦拭臺面和儀器表面。這些清除劑能有效使核酸酶失活,且通常無毒無腐蝕性,使用后需用無酶水擦拭去除殘留。
玻璃與金屬器皿,可通過干烤滅菌法,或使用核酸酶清除劑處理,后者更為便捷安全。
優先選購商業化的、無DNase/RNase的耗材,開包即用,更加可靠安全。
愛津生物所有耗材產品均通過ISO13485質量管理體系和CE認證,生產基地面積達26000㎡,配備5500㎡十萬級、500㎡萬級無塵車間,嚴格按照標準流程生產與質控,可為實驗人員提供真正“開包即用”的無酶耗材保障。
實驗前佩戴干凈的無粉手套和口罩。接觸任何潛在污染源(如門把手、電話、自己的皮膚或頭發)后應立即更換手套,操作RNA樣本時盡量避免說話。
在所有涉及試劑的步驟中最好都選用帶濾芯的吸頭,其高效過濾和強疏水性可有效防止氣溶膠污染移液器內部,避免交叉污染。
任何時候懷疑有污染可能,應立即更換手套、離心管及吸頭。將試劑進行小份分裝,每次實驗使用單獨的分裝瓶,避免反復取用導致整瓶試劑被污染。
針對內源性污染,關鍵在于快速有效地抑制樣本中核酸酶的活性。
樣本采集后應盡快處理。若無法立即提取核酸,必須采取快速冷凍措施(如直接投入液氮),以最大限度地減少RNA/DNA的降解。對于組織樣本,液氮碾磨是破碎組織并同步抑制內源酶最有效的方法。
有效保護樣本RNA不被內源酶降解,如RNAlater等。
在核酸提取階段,應使用能迅速滅活內源核酸酶的裂解液。對于內源酶含量高的組織(如肝臟、胰腺、植物組織等),推薦使用含苯酚的裂解液,以增強滅活能力。電動勻漿器與液氮碾磨配合使用,能確保組織細胞被快速、徹底地勻漿,使裂解液中的有效成分立即抑制住細胞內核酸酶。
愛津生物提供多種規格離心管及儲液耗材,為不同樣本類型提供匹配解決方案,從樣本處理到核酸提取全程防污染。
對于自配試劑,務必使用無酶水和經過處理的器皿配制。
愛津生物所有耗材均無DNase/RNase污染、無熱原、無PCR抑制劑,可放心用于高靈敏核酸實驗。
定期檢驗實驗室無DNase/RNase環境,同樣關鍵。
用待驗證的水或緩沖液孵育一段完整的RNA或DNA標準片段,一段時間后通過瓊脂糖凝膠電泳觀察。
條帶清晰表明無污染,出現拖尾或條帶消失則表明存在降解。
使用商品化的高靈敏度熒光底物檢測試劑盒,可以快速、定量地檢測出極微量的RNase或DNase活性,有助于精準定位污染源。
丟棄可能污染的吸頭、離心管等實驗室耗材,啟用新批次試劑。
使用專用核酸清除劑擦拭臺面、儀器,并對實驗區域進行紫外線照射。
愛津生物的耗材產品系列覆蓋900余種,包括深孔板、移液吸頭、管柱類、儲液槽、PCR系列、細胞培養類等,全面滿足不同實驗場景的無酶防控需求,為實驗室構建持久穩定的潔凈體系。
維持無DNase/RNase環境,是確保分子生物學實驗結果可靠的基礎。這不僅依賴于實驗人員的規范意識,更需要通過可靠的實驗耗材予以保障。
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實驗成功的密鑰已就位
帶上愛津生物這份耗材“潔凈保障”,
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愛津生物將以品質耗材為盾,
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